Le CFSE est l’indicateur de la prolifération cellulaire le plus largement utilisé pour l‘analyse en temps réel de la cellule. Cependant, ses utilisateurs rencontrent des problèmes importants :
1/ Le CFSE est très toxique pour les cellules.
Il réagit indifféremment avec tous les groupements amine. Il change donc de nombreuses fonctions des protéines intracellulaires importantes (telles que les GPCR de la membrane cellulaire).
2/ Le CFSE a une réponse plus lente et son utilisation manque de praticité.
L’intensité de fluorescence du CFSE des cellules de 2eme génération est diminuée de plus de 10 fois à partir de la 1ere génération. Nécessitant alors l’attente d’une autre génération pour commencer l’analyse de la prolifération cellulaire.
3/ L’élimination du milieu est nécessaire.
En effet, le milieu doit être éliminé pour l’analyse cellulaire avec un cytomètre en flux, car le CFSE réagit avec les composants du milieu.
Le CytoTell Green est conçu pour pallier à ces limitations et contraintes.
Il présente de nombreux avantages par rapport au CFSE.
1/ Une Cytotoxicité faible
Le CytoTell Green a une cytotoxicité très faible, car il ne réagit pas avec les protéines. Il est bien retenu dans les cellules, car la sonde est conçue pour minimiser les interactions “multiple drug resistance” (MDR) ( résistance polymédicamenteuse) qui rejettent de nombreuses sondes fluorescentes des cellules.
2/ Une réponse rapide & une praticité d’utilisation
Le CytoTell Green donne une réponse beaucoup plus rapide et est plus pratique d’utilisation que le CFSE.
Il n’y pas d’écart important d’intensité de flurorescence entre la 1ere et la 2eme génération de cellules.
Lorsque les cellules se divisent, le CytoTell Green est réparti de manière égale entre les cellules filles. Les divisions cellulaires peuvent être mesurées par la réduction de la moitié de l’intensité de fluorescence.
3/ Pas d’élimination du milieu
Il n’est pas nécessaire d’éliminer le milieu, car le CytoTell Green ne réagit pas avec les composants de celui-ci.
4/ Une sensibilité accrue
Le CytoTell Green est plus sensible que le CFSE. Aussi, jusqu’à 9 générations peuvent être visualisées.
5/ Une excellente stabilité et une utilisation pour le suivi à long terme des cellules marquées.
Le CytoTell Green est beaucoup plus stable que le CFSE. La solution stock peut être conservée à température ambiante pendant quelques jours.
Le CytoTell Green peut également être utilisé pour le suivi à long terme des cellules marquées.
Les cellules marquées avec le CytoTell Green peuvent être fixées et imperméabilisées pour l’analyse des cibles intracellulaires à l’aide de fixateurs contenant du formaldéhyde et des tampons standards de pérméabilisation à base de saponine.
Le CytoTell Green a une excitation maximale à 520 nm et peut être excité par un laser à 488 nm, le rendant compatible avec les filtres du FITC.
Deux conditionnements sont disponibles :
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